7-3
一、ELISA實(shí)驗(yàn)中血清的采集、處理和保存1、真空采血針采集2ml新鮮血液,加入無菌試管中。2、采血后室溫靜置1小時(shí)。3、將采集血液用離心機(jī)4℃,2500rpm離心10min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。4、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下,可放置保存24-48小時(shí);-20℃下,可放置保存1個(gè)月;-70℃下,可放置保存6個(gè)月。5、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶...
6-14
玻璃器皿的清洗在制備培養(yǎng)基的過程中,要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況,經(jīng)過一定的處理,洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝,經(jīng)過滅菌等準(zhǔn)備就緒后,才能使用。1、新購的玻璃器皿除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時(shí),使游離的堿性物質(zhì)除去,再以流水沖凈。對(duì)容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉(zhuǎn)動(dòng)容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸,數(shù)分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架...
5-30
出現(xiàn)問題出現(xiàn)問題的原因解決辦法曲線OD值不正常試劑盒未回溫試劑盒回溫到25℃溫度控制不好控制正確溫度孵育時(shí)間不準(zhǔn)確控制孵育時(shí)間洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干陽光直射,對(duì)著風(fēng)直接吹避風(fēng)避光酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm抗體的稀釋錯(cuò)誤正確的稀釋抗體水質(zhì)問題用礦泉水代替白板洗滌液配制錯(cuò)誤正確的配制洗滌液少加液體(抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液)正確的步驟加液體錯(cuò)加液體無梯度標(biāo)準(zhǔn)品也污染換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板OD值不正常控制溫度時(shí)間在做一...
5-28
試劑,儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn),珠式、管式及磁性球ELSIA,國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,兩者均有詳細(xì)的使用說明,嚴(yán)格遵照規(guī)定操作,必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。一、標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)...
5-21
顯色培養(yǎng)基模擬灌裝應(yīng)盡可能地模擬產(chǎn)品本身所經(jīng)歷的與設(shè)備接觸的表面、容器密封系統(tǒng)、關(guān)鍵環(huán)節(jié)和關(guān)鍵工藝操作的接觸,根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝類型,確認(rèn)無菌生產(chǎn)工藝的模擬灌裝操作步驟,因凍干粉針劑無菌生產(chǎn)工藝是相對(duì)齊全的無菌生產(chǎn)工藝,下面以此為例,簡(jiǎn)介一下培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的關(guān)注點(diǎn)。顯色培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)主要應(yīng)關(guān)注以下內(nèi)容但不是全部,生產(chǎn)線的狀態(tài)、試驗(yàn)的頻率、培養(yǎng)基類型、灌裝持續(xù)時(shí)間、灌裝的數(shù)量、容器(西林瓶)體積、生產(chǎn)線速度、灌裝體積、挑戰(zhàn)性試驗(yàn)、培養(yǎng)、結(jié)果與評(píng)級(jí)、清場(chǎng)和清洗、模擬灌裝中...
5-17
本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。然而,影響ELISA試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。ELISA試劑盒的操作方法雙抗體夾心法1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖...
5-6
首先應(yīng)明確,只有有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提供的認(rèn)定值或標(biāo)準(zhǔn)值才能夠用于校準(zhǔn)、為其他物質(zhì)賦值以及測(cè)量正確度確認(rèn),并通過其使用來聲明測(cè)量結(jié)果的計(jì)量學(xué)溯源性。在我們的日常測(cè)量中,還會(huì)使用其它類型的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),它們主要用于開展測(cè)量質(zhì)量控制、測(cè)量精密度確認(rèn)等。有時(shí),在缺少有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的情況,也不得不使用這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來開展校準(zhǔn)等活動(dòng),但是應(yīng)進(jìn)一步評(píng)估這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否符合有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特征,或溯源性和量值不確定度水平能夠充分滿足測(cè)量結(jié)果溯源性和準(zhǔn)確度要求。有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的證書中,有時(shí)會(huì)提供一些額外的參考值...
4-24
請(qǐng)根據(jù)您需要稱量的重量和容許誤差選擇合適的天平。如稱量少于10mg的產(chǎn)品,建議使用十萬分之一的分析天平。在購買產(chǎn)品時(shí)也請(qǐng)注意產(chǎn)品的重量能否滿足您的需求。一般采用增量法或減量法進(jìn)行稱量,以下是一些建議供您參考:a.稱量前:建議將產(chǎn)品直立放置一段時(shí)間,使產(chǎn)品全部集中至底部,便于取用。尤其是粘稠狀物質(zhì),可以傾斜至與豎直方向呈45度,使產(chǎn)品集中在瓶底邊緣。如果當(dāng)心瓶蓋上有粘附,可以在未打開瓶蓋前甩動(dòng)瓶身,使產(chǎn)品集中至瓶底。b.粉末或晶體:建議采用增量法稱量,準(zhǔn)備合適的干燥容器,歸零后...
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